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　　ELISA實驗結(jié)果90%取決于它!樣本處理全攻略

　　ELISA實驗結(jié)果的可靠性高度依賴樣本處理的規(guī)范性，以下是關(guān)鍵要點總結(jié)：

　　一、樣本類型與處理原則

　　血清/血漿?

　　血清需室溫靜置1-2小時或4℃過夜后，3000×g離心15-20分鐘，避免溶血和反復(fù)凍融?。

　　血漿需使用EDTA或肝素抗凝，采集后30分鐘內(nèi)離心，避免室溫放置過久導(dǎo)致因子降解?。

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清?

　　1000×g離心20分鐘去除碎片，建議分裝保存并避免凍融?。若檢測低豐度蛋白，可濃縮樣本。

　　組織/細(xì)胞裂解液?

　　組織需按1:9(w/v)加入含蛋白酶抑制劑的PBS勻漿，冰上超聲或凍融裂解后5000×g離心?。

　　貼壁細(xì)胞需胰酶消化后PBS洗滌，超聲裂解時建議3×5秒(冰上操作)?。

　　二、關(guān)鍵注意事項

　　避免假陽性?：樣本需嚴(yán)格無菌，防止細(xì)菌污染(含內(nèi)源性HRP)或纖維蛋白原干擾?。

　　防止假陰性?：目標(biāo)蛋白易降解時需添加蛋白酶抑制劑，避免使用含NaN3或高濃度EDTA的保存液?。

　　標(biāo)準(zhǔn)化操作?：離心參數(shù)、凍融次數(shù)需統(tǒng)一，不同批次樣本處理條件需一致?。

　　三、特殊樣本處理

　　腦脊液/尿液?：需5000-6000×g離心去除沉淀，分裝后-80℃保存。

　　酸化樣本?：部分樣本需用HCl中和后檢測(如某些細(xì)胞因子)?。

　　四、常見錯誤與優(yōu)化

　　高背景?：可能因封閉不充分或洗滌不凈，建議使用5%脫脂牛奶+0.05% Tween-20封閉液?。

　　重復(fù)性差?：建議預(yù)實驗確定樣本稀釋倍數(shù)，確保OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)。

　　通過規(guī)范樣本處理流程，可顯著提升ELISA數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性?。

　　注：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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