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以下是?人抗著絲點抗體(ACA/CENP) ELISA試劑盒?的實驗使用說明書核心內容,綜合整理自多個供應商的標準化操作流程:
BS-1458人抗著絲點抗體(ACA/CENP)ELISA試劑盒
一、實驗原理?
采用雙抗體夾心法(固相ELISA),通過生物素標記的抗體與ACA/CENP結合,再經HRP標記的親和素催化底物顯色,顏色深度與樣本中ACA/CENP濃度成正比。
二、試劑盒組成?
組分 96T規(guī)格 48T規(guī)格 保存條件
酶標板 12孔×8條 6孔×8條 2~8℃
標準品(400ng/ml) 0.6ml 0.3ml 需稀釋后使用
生物素標記抗體 6ml 3ml 即用型
HRP-親和素 10ml 5ml 避光保存
底物A/B 各6ml 各3ml 避光(B液對光敏感)
終止液 6ml 3ml 腐蝕性,需密封
三、樣本處理?
血清/血漿?:
室溫凝固10-20分鐘,離心(2000-3000rpm,20分鐘)取上清,避免反復凍融。
抗凝劑推薦EDTA或肝素,避免溶血。
細胞上清/組織勻漿?:離心去除顆粒物,稀釋至線性范圍內。
四、操作步驟?
包被與孵育?:
標準品梯度稀釋后加入微孔板,每孔100μl,設空白對照(僅加稀釋液)。
37℃孵育60分鐘,洗滌3次(拍干,避免交叉污染)。
抗體反應?:
加生物素標記抗體50μl,37℃孵育30分鐘,洗滌。
加HRP-親和素100μl,避光孵育30分鐘。
顯色與終止?:
加TMB底物100μl,避光反應15-20分鐘,顯藍色。
加終止液100μl,黃色為最終顏色,30分鐘內測OD450nm(參考630nm扣除背景)。
五、注意事項?
安全操作?:
避免皮膚接觸終止液和底物B,操作時佩戴手套。
使用一次性吸頭,金屬加樣器可能干擾結果。
質量控制?:
標準曲線R2應≥0.99,樣本S/N值≥2.1判為陽性。
不同批次試劑不可混用。
六、技術支持?
部分供應商提供免費代測服務及實驗問題指導(如上海一研、森貝伽)。
完整英文說明書需聯系供應商獲取。
如需具體品牌試劑盒的差異說明或優(yōu)化方案,可進一步提供供應商名稱以便細化。
注:以上資料僅供參考,具體產品信息請咨詢技術老師或品牌供應商。
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